Какие стадии показывет ИФА на ВИЧ

Анализ на ВИЧ методом ИФА: точность, достоверность

Основным методом диагностики ВИЧ во всём мире является ИФА.Это отборочный тест, имеющий высокую точность. Тест-системы последних поколенийопределяют в крови пациента иммуноглобулины к ВИЧ и антиген p24. После получения реактивногорезультата требуется подтверждение диагноза при помощи иммуноблота.

Что такое ИФА?

ИФА (иммуноферментный анализ) – это основной скрининговыйтест на ВИЧ. Существует множество тест-систем. Но все они основаны на единомпринципе: реакции «антиген-антитело».

Не вдаваясь в технические подробности, объясним суть методадиагностики. Иммунная система человека после заражения любой инфекцией начинаетчерез некоторое время вырабатывать антитела (иммуноглобулины). Они бываютразных видов. Наибольшее клиническое значение имеют IgM и IgG.

Первыевырабатываются сразу после заражения, но довольно быстро исчезают из крови. IgGначинают синтезироваться позже, но циркулируют в крови не временно, апостоянно, пока инфекционный агент находится в организме. Так как ВИЧ неизлечивается средствами современной медицины, иммуноглобулины в крови больногоесть всегда.

Они определяются в течение всей жизни.

Антитела являются специфическими. Это означает, что ониимеют уникальную структуру, которая зависит от возбудителя. Любой патогенныймикроорганизм является носителем антигенов. Иммунная система распознает их иначинает образование антител, которые способны взаимодействовать только с этимиангинами.

Таким образом, если человек заразился ВИЧ, антитела в его организмевырабатываются только те, которые способны связываться с антигенами вирусаиммунодефицита. Но они не способны взаимодействовать с антигенами другихвозбудителей (например, бледной трепонемы при сифилисе, с вирусом герпеса ит.д.).

Таким образом, тот факт, что в крови обнаружены антитела к ВИЧ, говорито том, что и сам вирус иммунодефицита присутствует в организме.

Для простоты восприятия представьте, что антиген – этозамок, а антитело – ключ. При попадании в организм «замка» иммунная системаначинает изготавливать под него «ключи». Но они подходят только к «замку» ВИЧ,другие «замки» им открыть невозможно.

В ходе ИФА выявляются антитела с помощью готового антигена.Он содержится в составе тест-системы. При добавлении крови пациента, если в нейсодержатся антитела, они вступят во взаимодействие с этим антигеном. Реакциястанет заметной за счет изменения окраски. Чем больше оптическая плотностьраствора, тем выше концентрация антител.

Современные тест-системы также определяют антиген ВИЧ р24.Он является более ранним маркером инфекции, чем антитела. Принцип методааналогичный. С той лишь разницей, что к готовым антителам добавляется кровьпациента, которая может содержать антиген. Если он есть в сыворотке, топроизойдет соответствующая реакция, и цвет раствора будет окрашиваться.

Тесты первых поколений определяли только антитела IgG.Современные тесты определяют также более ранние IgM, антиген р24, поэтому ониявляются более чувствительными.

Ифа – метод диагностики вич

ИФА является скрининговым (отборочным) тестом на ВИЧ во всёммире. Это первый анализ, который назначается для проверки на ВИЧ-инфекцию.

Его главным преимуществом является высокая чувствительность.Этот показатель определяет риск ложноотрицательного результата. То есть,вероятность получения отрицательного результата исследования у ВИЧ-инфицированногопациента.

Для скринингового теста именно чувствительность является основнымкритерием качества. Это важно, чтобы не пропустить ни одного случаязаболевания. Не страшно, если при этом часть результатов окажутсяложноположительными. Потому что на основе одной только ИФА диагноз не ставят.

После получения реактивного результата этого исследования проводятсяподтверждающие тесты.

Чувствительность существенно отличается у разныхтест-систем. К тому же, она зависит от давности заражения. Чем больше временипрошло с момента инфицирования, тем ближе к 100% будет чувствительность ИФА.

ИФА, в ходе которого определяются антитела IgM, обладаетболее высокой чувствительностью. Она достигает 75% уже в первый месяц болезни.

Через три месяца положительным становится анализ у 96% ВИЧ-инфицированных,через полгода – у 99%, через год – у 100% больных. Определение антигена р24имеет чувствительность намного ниже – 79%. Однако этот недостатоккомпенсируется высокой специфичностью – 99,5%.

Поэтому эти тесты проводятсявместе – они дополняют друг друга, обеспечивая высокую точность лабораторногоисследования.

Таким образом, общая чувствительность ИФА с использованиемтеста 4 поколения, определяющего антитела и антигены, составляет в среднем 99%,а специфичность – 99,5%.

Хотя специфичность очень высокая, и для одногоконкретного пациента получение реактивного ответа с высокой вероятностьюговорит о реально существующей ВИЧ-инфекции, в условиях массового обследованияпациентов она недостаточная для установления диагноза.

Потому что 0,5% случаевприходится на ложнореактивные результаты. Таким образом, если бы тест ИФА былподтверждающим, 1 из 200 человек получил бы диагноз ВИЧ, которого на самом делеу него нет.

По этой причине ИФА не является основанием для установлениядиагноза. Всех пациентов направляют на иммуноблот. Это подтверждающий тест. Оноснован на выявлении антител. Только получение положительного ИФА,подтвержденного позитивным результатом иммуноблота, является основанием дляустановления диагноза ВИЧ.

Расшифровка результатов ИФА

Анализ ИФА на ВИЧ может быть только положительным или отрицательным.

В диагностике некоторых других инфекций используются такжеколичественные варианты теста. Определяется титр антител (концентрация). Врачисмотрят, высокий он или низкий, увеличивается или снижается.

Однако вдиагностике ВИЧ количественные тесты не используют, так как они не имеютдиагностической ценности. Если антитела есть, то человек болен, а если нет – тоздоров, и промежуточных результатов быть не может. При наличии антител неважно, сколько их.

В любом случае диагноз ВИЧ-инфекции может быть установлен(при условии, что подтверждающий тест тоже окажется положительным).

В мониторинге клинического течения заболеванияколичественные результаты ИФА тоже не играют роли. Титр антител не коррелируетс тяжестью заболевания.

Его возрастание не является поводом для назначения иликоррекции схемы терапии. Равно как снижение титра не стало бы признакомуспешности проводимого лечения.

Для мониторинга ВИЧ используются другие анализы– ПЦР с определением вирусной нагрузки, а также оценка уровня CD4-клетов в крови.

Таким образом, результаты ИФА могут означать следующее:

отрицательный – отсутствие ВИЧ инфекции илинедавнее инфицирование (через 1 месяц отрицательных результатов у инфицированныхпациентов 25%, через 3 месяца – 4%, через 6 месяцев – 1%);
положительный – с вероятностью 99,5% означает,что у пациента ВИЧ, то для исключения 0,5% вероятности ложнореактивногорезультата проводится подтверждающее исследование.

Что делать при положительном ИФА?

В случае положительного ИФА диагноз ВИЧ не ставится.Проводится подтверждающий тест. Для подтверждения диагноза применяютиммуноблот. В ходе тестирования возможно получения 3 видов результатов:

отрицательный;
реактивный;
слабоположительный.

У большинства пациентов будет получен положительный ответ.После этого диагноз ВИЧ считается подтвержденным.

При получении отрицательного или слабоположительногорезультата повторное исследование проводится через 1 месяц. В большинстве случаевв течение этого срока иммуноблот становится положительным, так как количествоантител в крови увеличивается.

Но если он остается сомнительным илиотрицательным, пациента наблюдают в течение 1 года, и он сдает анализы 1 раз в3 месяца.

После 12 месяцев наблюдения либо устанавливается диагноз ВИЧ, еслииммуноблот всё-таки становится положительным, либо констатируетсяложноположительная реакция ИФА, а пациент в дальнейшем не подлежит наблюдению.Его считают здоровым.

Вероятные причины ложнореактивного ИФА:

беременность;
гемодиализ;
около 20% ложнореактивных тестов обусловленыдругими инфекциями.

Если ИФА и иммуноблот оказались положительными, за пациентомустанавливают наблюдение и может быть назначена антиретровирусная терапия.

Показания к лечению существенно отличаются в российских иевропейских клинических рекомендациях. В российском протоколе рекомендованопроводить антиретровирусную терапию как можно раньше, всем без исключенияпациентам. Это приводит к снижению расходов на госпитализацию и лечение больныхсо вторичными ВИЧ-ассоциированными заболеваниями и снижает распространениеинфекции.

В европейских рекомендациях лечение взрослых небеременныхпациентов начинают при:

CD4в крови ниже 350/мкл;
CD4 меньше 500/мкл при наличии вирусногогепатита, рака, вирусной нагрузке от 100 тысяч копий в мл, возрасте пациентапосле 50 лет, прогрессирующем снижении CD4.

В США, как и в России, практикуется раннее назначениеантиретровирусной терапии всем пациентам.

По рекомендациям ВОЗ начинать терапию следует при концентрацииCD4-клеток 500/мкл и меньше.

Раньше терапию назначали при снижении CD4 до 200/мкл. Но впоследние годы во многих странах этот порог значительно увеличился, либолечение начали назначать сразу после установления диагноза. Это связано впервую очередь с появлением новых, менее токсичных препаратов дляантиретровирусной терапии.

Источник: https://ticf.org/novosti/analiz-na-vich-metodom-ifa-tochnost-dostovernost/

Результаты исследования в ИФА на ВИЧ

Первый шаг к выявлению заболевания ВИЧ-инфекцией – обследование. Стандартный метод диагностики ВИЧ-инфекции – исследование в иммуно-ферментном анализе (ИФА). В этой статье мы обсудим возможные результаты исследования в ИФА на ВИЧ и их интерпретацию.

Сдаемкровь на ВИЧ

Для анализа на ВИЧ-инфекцию в ИФА используют кровь, в процедурных кабинетах ее берут из локтевой вены. Выработкой АНТИТЕЛ организм отвечает на внедрение ЛЮБОГО чужеродного АНТИГЕНА (белка, микроорганизма). Анализ считается положительным, если в крови обнаруживают антитела (АТ) к ВИЧ. Их наличие регистрируется специальными приборами по оптической плотности.

ВАЖНО!В ИФА обнаруживают не сам вирус или его части, а антитела.

К сожалению, даже специализированные организации допускают серьезные ошибки, описывая процесс диагностики ВИЧ-инфекции. Возможно, это связано с тем, что информацию на сайт готовят люди «не в теме», копирайтеры, тиражирующие уже допущенные инфоляпы из статьи в статью. Как это случилось с сайтом Центра СПИД Курганской области.

Анализ в ИФА – стандартный, поскольку даже приполучении положительного результата в экспресс-тесте (по крови из пальца или послюне) потребуется подтверждение. Полученный положительный результатподтверждают в ИФА, с забором крови из вены.

ВАЖНО!В соответствии с законодательством обследование на ВИЧ-инфекцию граждан РФпроводится бесплатно.

По желанию граждан обследование может быть проведеноанонимно.

Положительныйрезультат лабораторного исследования

Положительный результат в ИФА – самый неприятный. Никто не радуется заболеванию. Тем более, если известие о заболевании падает как снег на голову – неожиданно и на фоне полного благополучия. Лаборатории оснащены самым современным диагностическим оборудованием, которые вероятность ошибки практически исключают.

Если это, конечно, не рукотворная ошибка, связанная с небрежностью медработника или лаборанта — их необходимо исключать.

Человеку в такой ситуации трудно принять известие орезультате анализа и реагировать на него люди могут по-разному. Для того, чтобыреакции не были непредсказуемыми в ответ на неожиданный результат, проводитсядо- и послетестовое консультирование.

Во время дотестового консультирования консультант (это не обязательно врач!) должен помочь человеку оценить собственные риски инфицирования. А еще – объяснить, какие результаты могут быть получены, и как это отразится на дальнейшей жизни – после обследования на ВИЧ-инфекцию.

Ложноположительный результат в ИФА

Бывают еще и ложноположительныерезультаты (ЛПР) исследований. Их причина – перекрестно реагирующиеантитела, а не качество диагностических тест-систем. Современные диагностическиетест-системы обеспечивают высокую (не менее 98%) специфичность, то есть вполненадежны.

Но есть факторы, влияющие на получение ложно-положительных результатов в ИФА-диагностике. Они хорошо изучены и связаны с происходящими в организме иммунными реакциями. Причем наличие этих заболеваний или состояний вовсе не гарантирует 100%-ое получение ЛПР. Об основных факторах, влияющих на возникновение ЛПР, читайте здесь.

К сожалению, наличие ЛПР позволяет так называемымВИЧ-диссидентам делать выводы о несовершенстве диагностики и, более того – отом, что ВИЧ-инфекции не существует. Мол, положительный результат теста может бытьполучен на что угодно. Значит, человеку выставляют диагноз и начинают еголечить неизвестно от чего.

Подтверждающий тест — защита от ошибки

Это не так, поскольку достоверность положительногорезультата в ИФА подтверждается разными способами. В том числе существуетпрактика повторного взятия новой порции крови. Но самый верный способудостовериться в правильности полученного результата в ИФА – это анализ виммуноблоте.

Исследование на ИБ проводятся с помощью тест-полосок, позволяющих определить отдельные белки ВИЧ. Это важно для диагностики.

ВАЖНО!Если получен ложноположительный результат в ИФА, он будет снят или подтвержденв кратчайшие (несколько дней) сроки.

Да, придется еще пару дней попереживать, этонеизбежно.

Отрицательныйрезультат исследования в ИФА

Отрицательный результат исследования в ИФА, особеннокогда вы находились в ситуации риска инфицирования ВИЧ – это удача. Вы обманулистатистику и получили шанс не вставать вновь на одни и те же грабли. Получаетсяэто не у всех.

Отрицательный результат – не индульгенция на будущие ошибки, а возможность переосмыслить свою жизнь и поведение. Не сделали выводы – обязательно ошибетесь вновь. Не факт, что и на этот раз вам повезет.

Иногда спокойствие хуже беспокойства. Лучше поволноваться понапрасну, чем успокоиться без достаточных к тому оснований. Потому что отрицательный результат тоже может быть ложным. Об этом мы писали здесь.

Ложноотрицательныйрезультат в ИФА

Ложноотрицательный – это весьма условно. Результат лабораторного исследования формально является отрицательным, врачи-лаборанты не допустили ошибок и качество тест-систем здесь вовсе не при чём.

Чаще всего «ложноотрицательный» результат в ИФА наВИЧ связан с недостаточным количеством антител в сыворотке крови. Причинойэтого может стать слишком короткое время, прошедшее после инфицирования, илимедленная выработка антител иммунной системой конкретного человека.

В первом случае это происходит из-за того, что человек, находящийся в состоянии тревоги, старается обследоваться как можно быстрее и успокоиться.

Он бежит на обследование и, не получив качественного консультирования, удовлетворяется справкой об «отрицательном» результате обследования на ВИЧ-инфекцию.

Во втором случае все дело в организме – мы все такие разные! А в ситуации, чреватой инфицированием, могут оказаться и пожилые люди.

Почему спокойствие хуже беспокойства? Потому чточеловек, успокоившись и вздохнув с облегчением, может не изменить своегоповедения. Человек, инфицированный ВИЧ, способен передавать вирус практическисразу после заражения.

Запомните!

Своевременно установленный диагноз – залог вашего здоровья и безопасности близких людей.
ИФА – стандартный метод диагностики, основанный на обнаружении антител к ВИЧ.
Для выработки антител требуется время, в среднем – три месяца.
Исследование в ИФА, проведенное в эти сроки, может дать отрицательный результат, хотя ВИЧ уже находится в вашем организме.
Ложноположительный результат, безусловно, лучше, чем ложноотрицательный. Он может не подтвердиться.

А что же делать с Курганским Центром СПИД и с информацией, размещенной на его сайте? Да как обычно – поместим на «передержку», в «черный список» инфоляпов на нашем сайте.

Олейник Сергей Викторович,врач-эпидемиолог, организатор здравоохранения.

Резюме— https://docs.google.com/document/d/1S5W9Eokf9k0a8gCssuPxxny—3LYM6wnOh0EqwBoMhw/edit?usp=sharing Электронная почта: soleynik2008@yandex.ru Страница ВК: https://.com/id432737701 БлогЖЖ: https://aidsexpert.livejournal.com/ Твиттер-аккаунт:https://.com/aidsexpert Канал на ЯндексДзен: «О ВИЧ-инфекции популярно»

Источник: http://aids-infocenter.ru/rezultaty-issledovaniya-v-ifa-na-vich/

Ифа анализ крови на вич

ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.

ВИЧ. Причины и последствия

Вирус иммунодефицита человека – одна из самых страшных инфекций для нашего поколения.

ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита.

ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь.

Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью.

До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете.

Причины возникновения ВИЧ

Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:

проходящих в течение месяца курс инъекционного лечения;
имеющих сексуальные отношения без специальных средств предохранения;
переносчиков инфекций, передающихся во время сексуального контакта;
пациентам после прохождения процедуры переливания крови либо укола обнаружения причины свертывания крови в восьмидесятые годы.

Если у вас есть сомнения относительно вашего ВИЧ-статуса и опасения, связанные с возможностью заражения, рекомендуется незамедлительно обратиться за помощью в любое медицинское учреждение нашей страны для проведения комплексного обследования на ВИЧ. Результат на анализы получают в течение месяца. Людям в группе риска по ВИЧ рекомендуется проходить обследование через каждые 4 месяца.

Как сдать анализ

Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:

лучше не кушать с вечера, а сдавать анализ натощак утром;
не советуют загружать организм физической работой;
употреблять здоровую пищу, воздержаться на некоторое время от сигарет и алкоголя;
для исключения ложных показателей теста не стоит сдавать анализ после лечения серьезных заболеваний.

Анализ крови на РМП: что это такое, как сдавать, расшифровка

Сама процедура сдачи анализа осуществляется довольно быстро, а вот исследование образца и определение показателей проходит от нескольких дней до половины месяца. В случае, если у вас есть боязнь уколов или вы склонны к головокружениям от вида крови, стоит заблаговременно известить об этом медперсонал.

Суть проведения анализа

Обычно перед сдачей анализа медицинский работник просит заполнить анкету, в которой вы подписываете пункт о согласии на проведение процедуры. Специалист предлагает брошюры для ознакомления, объясняет основные принципы проведения теста:

Кожный покров локтевого сустава пациента обрабатывается обеззараживающей жидкостью;
Пережимают локтевую вену специальной повязкой, ограничивая отток крови;
С помощью шприца производят забор материала из вены пациента, обычно 5 мл;
Использованный шприц выбрасывают, пациенту обрабатывают место инъекции и просят согнуть руку в локте, чтобы уменьшить кровотечение;

Вы, возможно, будете ощущать некоторый дискомфорт при проведении анализа и даже болезненные ощущения при использовании шприца. Дрожь в руке после забора крови – нормальное явление. Дышите ровно, не стоит волноваться – дискомфорт быстро исчезнет.

Проба материала подвергается тщательному лабораторному исследованию: в специальном медицинском приборе – чашке Петри находится жидкость с антигеном. Антиген – чужеродный микроорганизм, провоцирующий защитную реакцию организма.

Испытуемую пробу крови смешивают с жидкостью в чашке Петри. Антитела, содержащиеся в крови, образуют соединения с антигеном, а специалист визуально фиксирует изменение окраски вещества.

То есть результат теста положительный, антитела найдены, значит, инфекция есть в организме. Результат анализа действителен 4 месяца.

Осложнения при анализах

Как правило, проведение анализов не представляет опасности для здоровья, тем не менее, редкие случаи осложнений имеют место быть:

Обморочное состояние, если пациент слишком эмоционально переживает процедуру;
Образование гематомы на месте инъекции;
Попадание инфекции при инъекции;
Плохая свертываемость крови.

Если пациент подвержен этим рискам, болен гемофилией или испытывает другие проблемы, препятствующие нормальному проведению анализа, необходимо в первую очередь сообщить об этом врачу.

Что такое ИФА

ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале.

С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП.

Он помогает выявить ВИЧ и другие инфекции, передающиеся половым путем.

Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами.

Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%.

Что делать при положительном ИФА

Отрицательный иммуноферментный анализ 3-го и 4-го поколения показывает с высокой достоверностью (98%), что человек здоров. Для подтверждения положительного ВИЧ-статуса проведения ИФА недостаточно.

Если при первом и повторных тестах в крови обнаружены антигены ВИЧ, человек получает направление на иммуноблоттинг. Когда в ходе исследований выясняется, что человек имеет ВИЧ-позитивный статус, ему следует обратиться к врачу. Он определит вирусную нагрузку и назначит терапию.

Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать эффективность лечения, тест ИФА периодически повторяют.

Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) не проявляет себя. Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат.

Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях.

Источник: https://aids24.ru/diagnostika-vich/analiz-na-vich-metodom-ifa-tochnost-dostovernost

ИФА-диагностика: в чем суть, определение антител, как проводят и при каких болезнях эффективна?

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента.

Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию.

И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях.

Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Область применения метода ИФА

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины.

Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое.

Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, гепатиты В и С, хламидиоз, сифилис, уреа- и микоплазмоз, герпетическая и TORCH-инфекции, а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

В чем суть ифа?

Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки.

Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами.

Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд.

На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Результаты ИФА на примере сифилиса

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования.

Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой.

Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.).

К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории.

Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным.

Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок.

Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Ифа находит хламидию, цитомегаловирус и даже паразитов

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении хламидии тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается цитомегаловируса (ЦМВ), то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает.

Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G.

Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ).

На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

Алгоритм ИФА-исследований при подозрении на ЦМВ

Что такое паразиты – вряд ли стоит рассказывать, ведь они преследуют человека, начиная с детского возраста и, в полном смысле слова, отравляют ему жизнь (продукты жизнедеятельности паразитов очень ядовиты). Они бывают внушительных размеров (гельминты, а попросту – глисты) или маленькие (амебы, трихомонады, лямблии).

До появления в клинической лабораторной диагностике иммуноферментного метода найти паразитов было весьма сложно, теперь же, как говорят: «Нет проблем!».

А все потому, что есть ИФА, который отыщет паразита, в какой бы форме тот не пребывал (цисты, личинки, яйца или взрослая особь) и в какой бы части человеческого тела не находился.

Для этого нужно лишь взять кровь из вены и найти антитела, которыми организм уже ответил на чужеродные антигены.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.